层析柱（色谱柱）吸附介质的充填及洗脱规程

层析柱（色谱柱）吸附介质的充填及洗脱规程

一、 柱头安装是否合适及是否严密的检查

        1、检查下柱头是否按图纸要求安装?（要求按图纸要求安装）

        2、检查下柱头内，是否安装了防止吸附剂（例如硅胶）漏出的滤布（或滤网）。

        3、所用滤布（滤网）的材质要求能耐所用溶剂的腐蚀，而且孔径很小，一般要求使用500目以上孔径大小的滤布（网）。

        4、下柱头安好，紧固后，从柱上端（开口）加入所用洗脱剂中极性较小的一种溶剂（例如已烷、石油醚、甲苯等），使溶剂液面比下柱头上部分离出20-30厘米，仔细观察下柱头是否漏溶剂。如果漏，则必须坚固（或重装），直至不漏为止。

        5、检查确实不漏后，放出柱内溶剂，准备装吸附剂（例如硅胶等）。

二、充填吸附剂

以充填（或称装填）硅胶为例，作如下说明：

1、 干法装柱

①、取吸附剂（例如硅胶）记下硅胶的量，（等装完柱后，检查剩余硅胶量，就可以知道装入柱中的硅胶量了）。

②、工作人员戴上口罩，准备好木槌，有人从柱上端倒入一定时的硅胶，柱下边有人用木槌敲击柱外壁，振实硅胶；一边加硅胶，一边敲击柱；最好硅胶加到什么高度，就在此高度敲击；且向上下移动敲击。如此，直至硅胶装满时为止；再上下移动敲击一阵子；至硅 胶上平面不再下沉，而且硅胶面很实时为止。

③、如果体系中没有设预柱，层析柱中上端硅胶不把装满，留出空间待“上样”用。

④、如果有预柱的体系，层析柱应装满硅胶。

⑤、干法装柱，粉尘大，且敲击声大，柱外表易变成不光亮，但不耗溶剂。

2、湿法装柱

①、同上，准备一定时的硅胶，且记录下硅胶量。

②、准备一只30-50升的耐溶剂腐蚀的塑料桶，例入极性小的且配洗脱剂时需用的溶剂（例如已烷，石油醚、甲苯等），再例入硅胶，搅拌混合。再将此浆液倒入（或用勺舀）层析柱中。 这样，一次次倒入后，柱内浆液面上升到柱上部；再将柱下端出液管通过一缓冲       罐与真空系统接通（事先接好）。开关真空，使柱上端浆液慢慢下降，再不断补浆液（最好使硅胶面总是在液面下，这样柱中几乎没有空气），直至装满。再不断开真空抽液，不断从柱上端加入溶剂，直至硅胶面基本不降为止。

③、湿法装柱，有一部分溶剂损耗，且溶剂气味大，环境不佳；但粉尘少，且不伤柱的外表面。

④、干法装的硅胶量，有可能比湿法装得稍多一点

三、上样

        1、干法上样

        ①、制样：将物料用极性较大的且洗脱剂中需用的溶剂溶解成浆状（或溶液状），再加入硅藻土（或硅胶）充分混合，晾干；再粉碎成粉未状，混合均匀。 

②、将制好的样品，置于预柱中或层析柱上端硅胶床层的上面，铺平；再放上滤布（网），筛板，再按图装好柱上端封头。

2、 湿法上样

①、制样：将物料用极性比硅胶小的溶剂（例如：二氯甲烷、乙酸乙醇-乙烷混合液、乙烷、甲苯等）溶解或制成浆状，直接倒在层析柱硅胶床层的上面，铺平即可（如果上样液多，也可以用泵（或氮气）慢慢打（压）入柱中）。

②、同上，放上滤布（网）筛板，装好上封头。

四、洗脱

        1、平衡柱子

即用洗脱剂中极性小的溶剂（例如乙烷、二氯甲烷、甲苯等）用计量泵（或氮气）打入（压入）层析柱上端。此溶剂因极性小于硅胶，不会把吸附在硅胶上端面的物料中有用物质洗脱下来，而只能将物料中的极性很小的油脂等杂质洗下。另外，此过程还可以将柱中硅胶中的大量空气往下赶出柱外。这个过程俗称“平衡”柱子或“平衡”吸附剂。可使硅胶被溶剂浸润，且排出空气，有利于续后的洗脱分离过程。

当平衡用的溶剂从柱下流出后，可以停止此过程，改用洗脱剂洗脱分离过程；平衡过程也可以再理行一段时间，将柱子中的空气多排出一些，但溶剂耗量也会增加。

2、洗脱

根据小试结果，用一定组成的洗脱剂洗脱柱子中硅胶上吸附着的各种物质，且达到分离。洗脱时溶剂的流速选用1-50px/min较合适。

3、洗柱

当有用物质流出柱子后，再改用极性大的溶剂将硅胶床层内的极性大的杂质洗下，排出柱外。

4、再“平衡”柱子

用极性小的溶剂，将柱中前过程中留下的极性大的溶剂顶出柱外，接着可进行下批物料的上样过程。

资料来源：迈思通(北京)科技有限公司