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层析柱(色谱柱)吸附介质的充填及洗脱规程

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层析柱(色谱柱)吸附介质的充填及洗脱规程


一、 柱头安装是否合适及是否严密的检查

        1、检查下柱头是否按图纸要求安装?(要求按图纸要求安装)

        2、检查下柱头内,是否安装了防止吸附剂(例如硅胶)漏出的滤布(或滤网)。

        3、所用滤布(滤网)的材质要求能耐所用溶剂的腐蚀,而且孔径很小,一般要求使用500目以上孔径大小的滤布(网)。

        4、下柱头安好,紧固后,从柱上端(开口)加入所用洗脱剂中极性较小的一种溶剂(例如已烷、石油醚、甲苯等),使溶剂液面比下柱头上部分离出20-30厘米,仔细观察下柱头是否漏溶剂。如果漏,则必须坚固(或重装),直至不漏为止。

        5、检查确实不漏后,放出柱内溶剂,准备装吸附剂(例如硅胶等)。

 

二、充填吸附剂

以充填(或称装填)硅胶为例,作如下说明:

1、 干法装柱

①、取吸附剂(例如硅胶)记下硅胶的量,(等装完柱后,检查剩余硅胶量,就可以知道装入柱中的硅胶量了)。

②、工作人员戴上口罩,准备好木槌,有人从柱上端倒入一定时的硅胶,柱下边有人用木槌敲击柱外壁,振实硅胶;一边加硅胶,一边敲击柱;最好硅胶加到什么高度,就在此高度敲击;且向上下移动敲击。如此,直至硅胶装满时为止;再上下移动敲击一阵子;至硅 胶上平面不再下沉,而且硅胶面很实时为止。

③、如果体系中没有设预柱,层析柱中上端硅胶不把装满,留出空间待“上样”用。

④、如果有预柱的体系,层析柱应装满硅胶。

⑤、干法装柱,粉尘大,且敲击声大,柱外表易变成不光亮,但不耗溶剂。

2、湿法装柱

①、同上,准备一定时的硅胶,且记录下硅胶量。

②、准备一只30-50升的耐溶剂腐蚀的塑料桶,例入极性小的且配洗脱剂时需用的溶剂(例如已烷,石油醚、甲苯等),再例入硅胶,搅拌混合。再将此浆液倒入(或用勺舀)层析柱中。 这样,一次次倒入后,柱内浆液面上升到柱上部;再将柱下端出液管通过一缓冲       罐与真空系统接通(事先接好)。开关真空,使柱上端浆液慢慢下降,再不断补浆液(最好使硅胶面总是在液面下,这样柱中几乎没有空气),直至装满。再不断开真空抽液,不断从柱上端加入溶剂,直至硅胶面基本不降为止。

③、湿法装柱,有一部分溶剂损耗,且溶剂气味大,环境不佳;但粉尘少,且不伤柱的外表面。

④、干法装的硅胶量,有可能比湿法装得稍多一点

 

三、上样

        1、干法上样

        ①、制样:将物料用极性较大的且洗脱剂中需用的溶剂溶解成浆状(或溶液状),再加入硅藻土(或硅胶)充分混合,晾干;再粉碎成粉未状,混合均匀。 

②、将制好的样品,置于预柱中或层析柱上端硅胶床层的上面,铺平;再放上滤布(网),筛板,再按图装好柱上端封头。

2、 湿法上样

①、制样:将物料用极性比硅胶小的溶剂(例如:二氯甲烷、乙酸乙醇-乙烷混合液、乙烷、甲苯等)溶解或制成浆状,直接倒在层析柱硅胶床层的上面,铺平即可(如果上样液多,也可以用泵(或氮气)慢慢打(压)入柱中)。

②、同上,放上滤布(网)筛板,装好上封头。

 

四、洗脱

        1、平衡柱子

即用洗脱剂中极性小的溶剂(例如乙烷、二氯甲烷、甲苯等)用计量泵(或氮气)打入(压入)层析柱上端。此溶剂因极性小于硅胶,不会把吸附在硅胶上端面的物料中有用物质洗脱下来,而只能将物料中的极性很小的油脂等杂质洗下。另外,此过程还可以将柱中硅胶中的大量空气往下赶出柱外。这个过程俗称“平衡”柱子或“平衡”吸附剂。可使硅胶被溶剂浸润,且排出空气,有利于续后的洗脱分离过程。

当平衡用的溶剂从柱下流出后,可以停止此过程,改用洗脱剂洗脱分离过程;平衡过程也可以再理行一段时间,将柱子中的空气多排出一些,但溶剂耗量也会增加。

2、洗脱

根据小试结果,用一定组成的洗脱剂洗脱柱子中硅胶上吸附着的各种物质,且达到分离。洗脱时溶剂的流速选用1-50px/min较合适。

3、洗柱

当有用物质流出柱子后,再改用极性大的溶剂将硅胶床层内的极性大的杂质洗下,排出柱外。

4、再“平衡”柱子

用极性小的溶剂,将柱中前过程中留下的极性大的溶剂顶出柱外,接着可进行下批物料的上样过程。

 

 


资料来源:迈思通(北京)科技有限公司



2017年10月22日 13:34
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